Muzeum Mostu Karola w Pradze poświęcone jest historii mostu, legendom z nim związanym, a także kościołowi Zakonu Krzyża z Czerwoną Gwiazdą. Jest tu również ekspozycja poświęcona wyrobom szklanym. Muzeum organizuje zajęcia dla dzieci i młodzieży. Prowadzony jest tu sklep z pamiątkami i książkami dotyczącymi historii mostu i Pragi.
Otwarcie Muzeum Mostu Karola w Pradze odbyło się 17 czerwca 2007 roku. Muzeum prezentuje kompleksowo historię mostu oraz budynków z nim związanych, jak m.in. wcześniejszy Most Judyty, który znajdował się wcześniej w tym miejscu, a przy jego wejściu znajduje portal kościoła dawnego malutkiego kościoła Zakonu Krzyża z Czerwoną Gwiazdą.
Prezentowane są tu także wizualizacje Mostu Karola w trzech perspektywach. Perspektywa historyczna ukazuje prawdziwe dzieje mostu. Perspektywa legendarna przedstawia legendy związane z budowlą, m.in. o duchach i diabłach na Diabelskim Strumieniu. Perspektywa rybiego oka pozwala na obejrzenie mostu z perspektywy wód Wełtawy.